如何在制藥工藝放大中用好柱層析分離?
更新時(shí)間:2021-08-18 瀏覽次數(shù):1070
盤一盤柱層析在工藝放大的注意事項(xiàng)
工藝成功放大且穩(wěn)定一直是工藝工程師們致力的方向。要學(xué)會擺脫實(shí)驗(yàn)室的思維定勢,根據(jù)車間實(shí)際情況、實(shí)際設(shè)備、實(shí)際工藝,從宏觀控制出發(fā),多多注意細(xì)節(jié),多多完善工藝。
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柱層析分離技術(shù),在小分子藥物的實(shí)驗(yàn)室研發(fā)和大規(guī)模生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。對于工藝開發(fā)人員來說,如何在放大中精確還原研發(fā)里的工藝,是一門精密的科學(xué),也是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)的藝術(shù)。下面我們以硅膠填裝柱為例,詳細(xì)梳理柱層析在工藝放大中的注意要點(diǎn)。
1.工藝放大參數(shù)選擇
柱層析的研發(fā)數(shù)據(jù)通常包括:樣品量、硅膠型號以及量、柱子高度、流動相成分和比例、流速以及產(chǎn)品分離時(shí)段。
我們先用色譜分離基本方程來還原研發(fā)工藝
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這個公式說明分辨率與塔板數(shù)、選擇性、滯留因子之間的關(guān)系。
在放大的過程中,由于研發(fā)工藝已經(jīng)確定,硅膠型號、流動相成分和比例這幾個關(guān)鍵因素都是已知,所以分離的選擇性和滯留因子也是確定的。但在車間生產(chǎn)的時(shí)候,還需要保證硅膠的壓實(shí)程度,要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室裝填硅膠柱的密度等同放大,還要保證填裝硅膠的浸潤程度,通過流動性出口氣泡情況或者通過反向填料確認(rèn)一致性。換言之,工程師更加注重模擬實(shí)驗(yàn)室填裝柱的理論塔板數(shù)。
一般情況下,工程師會盡量保證柱子高度一致,通過擴(kuò)大柱子的直徑來滿足放大的要求,也就是等板高度??墒乔闆r往往不會和想象一致,實(shí)際上,車間的柱子的直徑經(jīng)常無法滿足放大的系數(shù)。這時(shí)候,單純地增加或者減少硅膠的量,以期滿足高度的要求,則會在實(shí)際生產(chǎn)過程中對于柱層析線速度參數(shù)的選擇上出現(xiàn)偏差,或者與實(shí)驗(yàn)室的情況不一致。
對此,老工程師的經(jīng)驗(yàn)是時(shí)間。由于硅膠,產(chǎn)品以及流動相(洗脫劑)均已經(jīng)確定,所以影響實(shí)驗(yàn)室和車間柱層析放大過程中的質(zhì)傳的關(guān)鍵點(diǎn)就在于時(shí)間。因此,可以引入一個接觸時(shí)間的概念:即在車間放大的柱層析,流動相和吸附在硅膠上的產(chǎn)品之間的接觸時(shí)間需要和實(shí)驗(yàn)室中的保持一致。我們可以通過一個簡單的公式計(jì)算:
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通過公式,我們得到了車間柱層析中的流動相的流量流速,等于說線速度也確定了。根據(jù)線速度再設(shè)計(jì)的柱子的參數(shù)。
1.吸附的熱效應(yīng)
網(wǎng)絡(luò)上能找到很多關(guān)于柱層析的注意事項(xiàng),但是基本都是關(guān)于實(shí)驗(yàn)室的操作。在車間生產(chǎn)時(shí)會遇到一些不一樣的問題,有的還很嚴(yán)重問題,甚至實(shí)驗(yàn)大牛都可能忽略,例如吸附的熱效應(yīng)。
從柱層析的原理來說,不管運(yùn)用的是溶解度差異,還是分子間作用力,基本都是吸附-解吸附的過程。所以,這里先重點(diǎn)說說硅膠柱層析分離工藝。
用于填裝柱子并分離有機(jī)物(非氣體)的硅膠,主要利用硅膠的羥基,用硅醇基團(tuán)作為吸附中心,利用氫鍵或者分子間誘導(dǎo)力進(jìn)行吸附,然后在洗脫劑的作用下進(jìn)行解吸附。不同物質(zhì)吸附和解吸附的快慢不一樣,分離的目的也就達(dá)到了。
但是在吸附的過程中,樣品跟硅膠的羥基在結(jié)合時(shí)會放熱,尤其是濕法上樣階段,大量樣品短時(shí)間內(nèi)吸附,放熱量很大。如果用低沸點(diǎn)的洗脫劑,比如二氯甲烷,熱效應(yīng)會很明顯。氣化的二氯甲烷會造成硅膠柱的壓力變化,造成明顯的空洞或者斷層,大大影響分離。實(shí)驗(yàn)室里是這樣,在車間放大生產(chǎn)時(shí),熱效應(yīng)加劇,可能直接造成分離失敗。所以,在放大生產(chǎn)中要想辦法避免或緩解放熱帶來的影響。
對策如下:
第一、降低洗脫液的溫度
一般車間會使用反應(yīng)釜或者移動罐進(jìn)行洗脫液的配制,在這種情況下,可以通過夾套控溫,將洗脫液的溫度控制在一個較低的合理范圍。
第二、避免壓力的變化
熱效應(yīng)導(dǎo)致的壓力變化可能引起硅膠柱的空洞或者斷層,但這種損害有時(shí)并不是那么明顯。所以在確定壓力和線速度的前提下,應(yīng)該避免過多的操作柱子,也不要頻繁改變洗脫液的壓力,防止影響柱子本身的壓力。需要注意的是,停柱子的時(shí)候——例如配制柱子完成時(shí),停止收樣時(shí)或者配制洗脫液時(shí)——柱子壓力往往會出現(xiàn)很大的波動,這時(shí)要按照緩沖壓力的順序來操作設(shè)備。車間柱層析的常見設(shè)備如下圖,在圖上標(biāo)注了相應(yīng)區(qū)域的閥門(A、B和C)。
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停止柱層析時(shí)應(yīng)該:
1.先關(guān)閉A區(qū)域的閥門,這樣層析柱下層空間的壓力會上升,最終流速歸零的時(shí)候,則層析柱上下方會保持恒定一致的壓力;
2、然后在關(guān)閉閥門B以及C,這樣層析柱就處于一個密封狀態(tài)。
3、接下去就是重點(diǎn)了:重新開啟柱層析。
所以,常規(guī)操作順序是:打開C和B,然后再打開A。
這種方式在實(shí)驗(yàn)室肯定沒問題,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室操作相對較快,幾乎可以同時(shí)在B處加壓且打開A處的閥門。車間可能操作相對具有延后性,且此時(shí)需要提醒的是,B區(qū)域相對于A區(qū)域來說,密封性會更差(具有壓力表,排空閥之類的多處接口),且洗脫劑從C到B是需要一定的時(shí)間,而先打開B處的閥門,有可能會導(dǎo)致B處的壓力驟降進(jìn)而A處的壓力或者層析柱內(nèi)部的壓力會反向沖擊B處,而導(dǎo)致內(nèi)部形成斷層以及空洞。所以,在車間內(nèi)重新啟動層析柱時(shí)需要另外的流程:
1、先打開C處閥門,然后打開A處閥門,此時(shí)A處以及層析柱內(nèi)部的壓力會從下而上逐步降低,形成洗脫劑的流速。
2、等待B處壓力表逐漸衰減成常壓后,打開B處排氣閥門;
3、打開B處閥門進(jìn)入洗脫劑的補(bǔ)充;
4、關(guān)閉B處排氣閥門進(jìn)行壓力的補(bǔ)充并通過控制A閥門控制到合理的流速。
當(dāng)然上述的流程也可以在停柱子前完成,主要目的還是使壓力緩慢從出口泄出,避免從B段進(jìn)行壓力的驟然衰減。
第三、控制洗脫劑的水含量
還記得硅膠的吸附原理么?其實(shí)就是利用氫鍵或者分子間誘導(dǎo)力進(jìn)行吸附,并在洗脫劑的作用下進(jìn)行解吸附。如果洗脫劑中有水分的存在,就會破壞氫鍵作用。所以,在放大過程中,我們一般會選擇和實(shí)驗(yàn)室相同品質(zhì)的洗脫劑,這樣能對洗脫劑含水量有一定控制,以免對分離產(chǎn)生影響。但由于生產(chǎn)中,成本是重要的考量標(biāo)準(zhǔn),所以車間使用柱層析進(jìn)行放大時(shí),在一定程度上會使用洗脫劑的回收工藝。
很多人常常只關(guān)注組成和比例,忽視其中的水分。這里需要提醒大家,硅膠是具有一定水分的,隨著洗脫劑的回收,其中的水分會不斷增加,尤其是多次回收后。因此,工程師在考慮洗脫劑回收的時(shí)候需要把水分的因素考慮其中,確保工藝的穩(wěn)定,避免出現(xiàn)柱層析的異常。
第四、防止非預(yù)制色譜柱的空洞或塌陷
這個問題,一直是工藝工程師們想努力克服的重點(diǎn)。其實(shí)不管使用干法還是濕法填柱,色譜柱均有一定概率出現(xiàn)空洞或塌陷,比如硅膠的性狀,柱子內(nèi)部的光滑程度,平整度和壓力等等因素,都會影響色譜柱。
總結(jié)
工藝成功放大且穩(wěn)定一直是工藝工程師們致力的方向。要學(xué)會擺脫實(shí)驗(yàn)室的思維定勢,根據(jù)車間實(shí)際情況、實(shí)際設(shè)備、實(shí)際工藝,從宏觀控制出發(fā),多多注意細(xì)節(jié),多多完善工藝。